多重PCR_SNP檢測

技術(shù)簡(jiǎn)介

多重PCR_SNP檢測是一種將多重PCR和高通量測序相結合的高效SNP檢測技術(shù)。通過(guò)對多個(gè)待檢位點(diǎn)設計特異性引物，利用多重 PCR 技術(shù)進(jìn)行擴增，即可一次性擴增出所有待檢位點(diǎn)序列，繼而結合高通量測序技術(shù)實(shí)現對大樣本多位點(diǎn) SNP 的檢測。

檢測原理

送樣建議

注：SNP位點(diǎn)數＞50個(gè)，每增加50個(gè)位點(diǎn)，體積增加10uL。

技術(shù)參數

技術(shù)優(yōu)勢

（1）適用性廣：該技術(shù)適用于所有有參物種的 SNP 檢測。

（2）靈敏度高：應用高通量的方法可完成對SNP位點(diǎn)及其周?chē)蛄械臏y定。

（3）通量高：將多重 PCR 與高通量測序相結合，運用 Illumina 測序平臺，一次可以完成3000個(gè)樣本200個(gè)SNP位點(diǎn)的檢測。

（4）成本低：對于大樣本、多位點(diǎn)SNP的檢測，多重PCR_SNP基因分型檢測的成本要遠遠低于 Sanger檢測。

（5）準確率高：HiSeq平臺進(jìn)行高通量深度測序，測序深度可達上萬(wàn) X，檢出率達 95%以上，檢測準確率可達到 98%以上。

案例分析

基于多重PCR擴增子目標測序進(jìn)行SNP基因分型^[1]

研究背景

新一代測序（NGS）技術(shù)使基因組重新測序能夠在個(gè)體間探索全基因組多態(tài)性，以及靶向重新測序，以快速和同時(shí)檢測與各種生物功能相關(guān)的基因中的多態(tài)性。因此，用于靶向重測序的簡(jiǎn)單且穩健的方法應促進(jìn)廣泛的生物學(xué)領(lǐng)域中的基因分型。

研究方法

檢測來(lái)自8個(gè)親本種質(zhì)的443個(gè)擴增子以及Bd21和Bd3-1雜交得到的F 1子代的SNP進(jìn)行基因分型。

研究結果

結果表明通過(guò)對模型草Brachypodium distachyon進(jìn)行基因分型，SNP的檢測率能達到95％。評估表明該方法為準確和穩健的SNP基因分型提供了有效的框架。

圖1 B. distachyon的8個(gè)自然種質(zhì)中各個(gè)染色體上的SNPs的鑒定和選擇概況

參考文獻

Onda Y, Takahagi K, Shimizu M, et al. Multiplex PCR Targeted Amplicon Sequencing (MTA-Seq): Simple, Flexible, and Versatile SNP Genotyping by Highly Multiplexed PCR Amplicon Sequencing[J]. Front Plant Sci. 2018, 9(201):1-10.