細菌基因組重測序
技術(shù)簡(jiǎn)介
細菌基因組重測序是對已有參考基因組信息的細菌進(jìn)行基因組水平的再測序,并對個(gè)體或者群體樣品進(jìn)行生物信息學(xué)分析,能夠分析近源菌種之間的單核苷酸多態(tài)性 (SNPs) 、插入 (Insertion) 、缺失 (Deletion) 、拷貝數變異 (CNV)等基因組水平變異類(lèi)型,為篩選菌株的優(yōu)良性狀,菌株抗藥性等研究提供指導與依據。
技術(shù)路線(xiàn)
送樣建議
濃度 (Qubit) | 體積 | 總量 | 基因組完整性 |
≥50 ng/μL | ≥30 μL | ≥20 μg | DNA 無(wú)降解 |
技術(shù)參數
細菌重測序 | 測序策略 | 數據量 | 周期 |
300bp 小片段文庫HiSeq/NovaSeq PE150 | 100X | 45個(gè)自然日 |
案例分析
細菌全基因組重測序闡述引起大腸桿菌自發(fā)突變的因制[1]
研究背景
完全了解一個(gè)進(jìn)化過(guò)程需要自發(fā)突變率,光譜識別以及物種特征三個(gè)因素。根據累積突變可以計算出每一代基因組的突變率。
研究目的
通過(guò)全基因組重測序技術(shù)研究進(jìn)化過(guò)程中自發(fā)突變效應影響。
研究結果
在三株大不相同的不同僅僅達到 50%,這也就說(shuō)明了每一代基因組中的突變率是 1–2×10?3 。四個(gè)因素決定了自發(fā)突變的發(fā)生:自身 DNA 聚合酶缺陷,內源性誘導 DNA 損傷,外源性藥物誘導 DNA 損傷,易錯聚合酶激活
圖1. DNA修復缺陷的大腸桿菌堿基替換率
參考文獻
[1]Foster, P. L., Lee, H., Popodi, E., Townes, J. P. & Tang, H. Determinants of spontaneous mutation in the bacterium Escherichia coli as revealed by whole-genome sequencing. Proc Natl Acad Sci U S A 112, E5990-5999, doi:10.1073/pnas.1512136112 (2015).
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